BLT小課堂 | 螢火蟲螢光素酶在ATP檢測中的應用

恒瑞機械

       ATP結構圖
　　發(fā)光反應的方程式：

　　研究歷史： 1885年螢光素及螢光素酶次被Dubois提取出來；1952年Strehler和Totter使用螢光素酶粗制品測定ATP；1961年White等人工合成了螢光素；1985年Dewet, JR等克隆了P. Pyralis螢光素酶基因并在大腸桿菌中表達，從中得到具有活性的螢光素酶，從而開啟了螢光素酶作為報告基因的歷程。 ATP的含量直接反應了細胞或微生物的含量，通過監(jiān)測ATP含量的改變，可以評價多種藥物、生物制劑或生物活性物質引起的細胞殺傷、細胞抑制和細胞增殖作用；另外ATP也常作為微生物污染的一個指標，檢測ATP含量能直接反映出其受污染程度。測定生物體中ATP的水平及其動態(tài)變化便成為監(jiān)測生物體的手段。接下來，小編將向大家具體介紹一下他在近年來的應用領域。
　　01 食品安的身體健康、生命安全長期受到微生物污染的威脅，營養(yǎng)瓊脂平板計數(shù)法是國際上針對微生物檢測的現(xiàn)有標準方法，然而該方法要求在 37 ℃下持續(xù)培養(yǎng) 48 h，過于繁瑣的操作無法實現(xiàn)快速檢測。現(xiàn)下，國內(nèi)也加大了對核酸法、電阻抗測量、免疫學方法、微菌落技術等各類微生物快速檢測技術展開了研究、應用。ATP生物發(fā)光法因快速、簡便且具有較高靈敏度的緣故，可用于實時監(jiān)控微生物污染，與食品行業(yè)需求相符合，故而有關該技術的研究與應用十分廣泛。 其檢測步驟通常為： ①首先根據(jù)ATP發(fā)光檢測試劑盒的使用說明將標準ATP按梯度稀釋，與酶、底物、緩沖液按比例混合，使用發(fā)光檢測設備（比如博鷺騰發(fā)光檢測系列）測量對應的發(fā)光值，繪制標準曲線。 ②提取樣品細胞中的ATP，稀釋，之后按比例與酶、底物、緩沖液混合，使用發(fā)光檢測設備測定發(fā)光值，代入標準曲線，即可知道樣品中ATP濃度。（ATP濃度與細胞濃度關系的測定：取對數(shù)生長期的細胞，離心濃縮后用苔盼藍染色，計活細胞數(shù)，之后在 96孔培養(yǎng)板上等比稀釋，測定其發(fā)光值，發(fā)光值代入標準曲線獲得ATP濃度，經(jīng)過計算即可獲得ATP濃度與細胞濃度關系。）
　　應用案例：
　　對應文獻： [1]周旻.ATP生物發(fā)光法檢測卵巢癌細胞對藥物的敏感性[J].廣東醫(yī)學,2000,21(4):293-295. [2]陳歷排.用微量板 ATP生物發(fā)光法檢測腫瘤細胞對藥物的敏感性[J].腫瘤,2000,20(2):103-105. [3]劉君.三磷酸腺苷發(fā)光法快速檢測結核分枝桿菌耐藥的研究[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學,2014,41(1):108-113. [4]梁鎮(zhèn)興.利用自主發(fā)光結核分枝桿菌快速連續(xù)檢測抗結核藥物的細胞內(nèi)活性[J].實用醫(yī)學雜志,2013,29(23):3823-3826. [5]張志敏.ATP釋放法測定人外周血NK細胞活性及初步臨床應用[J].免疫學雜志,1992,8(4):260-261. [6]湛學軍.三磷酸腺苷生物發(fā)光法分析等中藥抑制肝、胃癌細胞增殖活性的研究[J].江西醫(yī)藥,2005,40(11):706-708. [7]朱云仙.養(yǎng)心2號方對慢性心力衰竭大鼠心肌組織ATP及MMP的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2016,32(3):274-278. [8]彭艷.艾灸對脾虛大鼠空腸組織ATP含量和ATP酶活性的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2013,23(1):8-13.

　　高靈敏度板式發(fā)光檢測儀Lux-P110：目前已被多家學校、醫(yī)院、企業(yè)所使用，具有的靈敏度（≤10amolATP或≤20zmol 螢光素酶）、超寬的線性范圍（≥6個數(shù)量級），同時配備了兩個原位進樣器，支持雙螢光素酶報告體系的檢測。

　　高靈敏度管式發(fā)光檢測儀Lux-T020：管式發(fā)光檢測儀主要針對單樣品發(fā)光檢測的客戶，相比于Lux-P110，體積更加小巧，使用更加方便，靈敏度則與Lux-110相同。該系列設備支持試用，歡迎您與我們聯(lián)系。

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謝謝樓主，非常感謝